胶质母细胞瘤（胶质瘤四级）新型致癌基因

　　胶质母细胞瘤是WHO的IV级胶质瘤。尽管在手术和放化疗方面，GBM近年来，患者的平均生存时间变化不大。因此，阐明GBM发展机制，确定这种无法治愈的癌症的分子靶标是非常重要的。S100蛋白是属于EF手钙与蛋白质家族的低分子量蛋白结合，仅在脊椎动物中表达。S100A11是S蛋白质成员100。S100A11在人类角质形成细胞的生长调节中起着不同的作用，因为它可以通过增强表皮生长因子蛋白的活性来抑制Ca2+诱导和刺激生长。

　　S100A在许多癌症中，如乳头状甲状腺癌、结肠癌、胰腺癌和卵巢癌。但是，S100A11在GBM作用尚不清楚。因此，本研究旨在分析S100A11在GBM中的功能和机制。膜联蛋白A2属于膜联蛋白家族，是一种钙依赖性磷脂结合蛋白。ANXA许多肿瘤，包括神经胶质瘤，表达异常，ANXA通过调节细胞增殖、凋亡、入侵和转移，表达了细胞发育在肿瘤发育中的重要作用。

　　在这项研究中，调查S100A11在GBM致瘤特别是致瘤性的作用GBM细胞增殖、上皮间质转化、迁移、侵袭和沉默或过度表达GBM形成神经球。证据表明，证据表明。S100A11通过ANXA2介导的NF-κB促进信号通路GBM发展与进程。从癌症基因组图谱数据库中获取。

　　S100家族表达数据分析。S100家族表达与TCGA中GBM基因表达谱交互分析可以获得患者整体生存的相关性。医院提供胶质母细胞瘤组织和非肿瘤性脑组织。NBT它是从脑损伤后接受手术的病人那里获得的。每个病人都获得了书面知情同意。

　　GBM细胞系U251，U87，LN229，U118，A172和T98从上海细胞库购买。胶质母细胞瘤细胞含有10%胎牛血清Dulbecco改良Eagle培训基础培训。为诱导神经胶质瘤干细胞分化，GSC分离并补充N2，B27.3mML-谷氨酰胺5%FBS神经基础训练基础训练。为了在U在251细胞中表达S100A11，将S100A11的基因插入pWPXLd-puro在粒子中表达-S100A11融合蛋白。为了使U87细胞中的S100A沉默，短发夹RNA亚克隆到pLV-puro质粒中。

　　将细胞接种到96孔板中，然后在50孔板中uMEdU中染色4小时。细胞用4%以上的聚甲醛固定.5％TritonX-100透化。洗三次后，用磷酸盐缓冲盐水，细胞用1000uL的1×阿波罗反应。使用不清楚的部分DAPI染色，并在荧光显微镜下拍照。在6孔培养板中接种胶质母细胞瘤细胞。大约15天后，将细胞固定在甲醇中20分钟，然后染色0.结晶紫溶液1%。用数码相机拍照。

　　将细胞添加到无血清DMEM中预先涂有Matrigel小屋顶部，并将有10%FBS的DMEM下小室加入培养基。培养36小时后，用甲醇固定入侵细胞，用0固定.3%结晶紫溶液染色。每个孔都用显微镜随机拍照。细胞在6孔板中培养，并汇合至95%。线性伤口是由塑料移液器的尖端引起的。然后在0或48小时内在显微镜下拍摄线性伤口。如前面提到的3D迁移测定。流式细胞术的测定如上所述。用碘化丙啶染色确定细胞周期分布。

　　在膜联蛋白VPI确定凋亡细胞染色后的百分比。首先检查S100家族在GBM从TCGA数据库的表达，S100A2，S100A3，S100A6，S100A10，S100A11，S100A16和S100PBP均GBM组织上调与NBTs。然后，通过提高这些S100蛋白表达与GBM患者整体生存率相关，仅高水平S100A11是GBM患者整体生存率低的预后因素。此外，通过免疫组织化学和蛋白质痕迹检查GBM中S100A11的表达。免疫组织化学GBM组织和NBT在玻片上进行。蛋白质痕迹结果表明，蛋白质痕迹结果表明，NBT相比，GBM样品中的S100A11上调。

　　然后，蛋白质痕迹被检测出来S100A11在不同GBM细胞系中的表达。S100A11蛋白水平在U87细胞较高，而在U251细胞较低；因此，下降了；U87中的S100A11，并上调了U251中的S100A11。用针对S100A11抗体蛋白质痕迹分析的结果证实了U100细胞中S100A11的敲低和U251细胞中S100A11的过表达。使用CCK8，EdU和集落形成检测方法S100A11在GBM细胞增殖的作用。

　　在CCK8分析中，S100A11的下调明显抑制U87细胞增殖，其中U251细胞中的过表达表现出相反的效果。在EdU分析中，S100A11的下调明显减少EdU阳性U87细胞的百分比在于U251细胞中的过表达表现出相反的效果。与上述结果一致，克隆形成试验的结果表明，S100A11抑制作用减少了菌落的形成，过表达S100A增加了菌落的形成。流式细胞仪分析表明，S100A11的沉默使GBM细胞停滞在G1期，而S100A11的过表达导致S期细胞增多，G一期细胞较少。

　　根据之前的研究报告，CyclinD1和CyclinE1与G1.与逮捕有关，报告降低S100A11会降低CyclinD1和CyclinE1的表达水平。AnnexinVPI根据流式细胞仪的分析，S100A在早期凋亡细胞中增加11。击倒S100A11可增加促凋亡蛋白表达，减少抗凋亡蛋白表达。这些结果表明S100A11促进了GBM细胞增殖。

　　我们确定S100A11对GBM细胞中EMT的作用。结果表明，在敲低的地方。S100A11U在87细胞中，波形蛋白、纤连蛋白和N-钙粘在蛋白质的蛋白质水平下降，而钙粘在蛋白质上E-钙粘在蛋白质的蛋白质水平上升，在U251细胞中的过表达表现出相反的效果。U87细胞中S100A11的减少减少了侵袭细胞的数量。S100A11在U251细胞的过表达产生相反的结果。

　　在伤口愈合试验中，S100A11沉默的U87小时内迁移细胞数量显著减少。S100A11在U251细胞的过表达产生相反的结果。与此同时，S100A11下调抑制了3D与对照细胞相比，胶原基质中的细胞浸润，S100A下降的细胞显示出较少的迁移形式。S251A11在U251细胞的过表达产生相反的结果。S100A11促进GBM细胞EMT，迁移和入侵。

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• 文章标题：胶质母细胞瘤（胶质瘤四级）新型致癌基因
• 更新时间：2022-11-24 11:26:05